PCR, RT és RT-PCR, Real-Time PCR, Klónozás

PCR, RT  és RT-PCR, Real-time PCR,  Klónozás 

•  Ne hagyja olvasatlanul üzeneteit: GoScript^TM Reverse Transcriptase & Systems !

A Promega reverz transzkriptáz termékcsaládja új, minden eddiginél robusztusabb és megbízhatóbb taggal bővült. A GoScript^TM RT enzimet, melyet alapvetően qPCR applikációkhoz fejlesztettek ki, a legkényesebb igényeket is kielégíti, ami egy M-MLV-típusú enzimtől elvárható.

• Nagy érzékenység: a legritkább üzenetektől az abundáns transzkriptokig megbízható
• Tapasztalatok alapján összemérhető, vagy hatékonyabb működés a SuperScript II, ill. III-hoz képest
• Egyaránt használható klónozáshoz, illetve génexpressziós vizsgálatban, vagy IVT-hez is
• Hosszú RNS-ek átírása akár 9 kb-ig
• Garantált real-time kompatibilitás pl. a GoTaq qPCR Master mix-szel.
• Széles hőmérséklettartomány (37-55 fok): ajánlott erős másodlagos szerkezettel rendelkező RNS fajtákhoz
• Különleges RT puffer: cDNS-szintézis erős inhibítorok jelenlétében is 

Elektronikus E-Brochure anyagunkban lépésről-lépésre megismerheti a terméket. A képre kattintva letölthető a használati utasítás is.

Rendelési információk és kiszerelések:

• GoScript^TM Reverse Transcriptase 100 rxn A5003
• GoScript^TM Reverse Transcriptase 500 rxn A5004

Alkotórészek: enzim, 5X reaction buffer, MgCl_2. Reakció térfogat 20 ul, RT enzim/reakció igény: 1 ul.

• GoScript^TM Reverse Transcription System 50 rxn A5000
• GoScript^TM Reverse Transcriptase System 100 rxn A5001

Alkotórészek: enzim, 5X reaction buffer, MgCl_2, dNTP mix, Oligo (dT)_15, random primers, nucelase free water, Recombinant RNasin. Reakció térfogat 20 ul, RT enzim/reakció igény: 1 ul.

A GoScript enzimet ki is próbálhatja, melyhez kattintson a következő linkre:MINTAKÉRÉSI LEHETŐSÉG !!

__________________________________________________________________________________________________

•  Ragyogó megoldás a Promegától: új qPCR Master Mix! 

A Promega GoTaq® qPCR Master Mix néven új termékkel jelentkezett, melyet elsődlegesen a SYBRGreen-es kvantitatív PCR felhasználók figyelmébe ajánlunk. 

Az új GoTaq® qPCR Master Mix egy újfajta, saját gyártású fluoreszcens festéket tartalmaz, mely a kettős szálú DNS-hez kötődve erősebb fluoreszcenciát eredményez, mint a SYBR®Green I, ezáltal érzékenyebb detektálást tesz lehetővé. A mix a már bizonyított, rendkívül robusztus GoTaq® HotStart polimerázra épül, mely egy antitesttel blokkolt natív Taq polimeráz. A 2X Master Mix carboxy-X-rhodamine-t (CXR) tartalmaz, ez a több real-time PCR készülék esetében szükséges ROX passzív festék megfelelője. 

Jellemzők 

• A 2X master mix összetevői: dNTP, MgCl2, GoTaq HS enzim, puffer, CXR
• Széleskörű kompatibilitás: a festék a SYRBGreen I/FAM csatornán detektálható
• A SYBR®Green-nél erősebb fluoreszcencia: nagyobb érzékenység, tágabb dinamikus tartomány
• Ideális low-copy targetek detektálásához
• Strapabíró GoTaq® HotStart enzim: kompatibilis hosszú programokkal is (45-50 ciklus)
• Rövid enzimaktiválás: 95ºC  2 perc
• A kit komponensei 3 hónapig 2-8 fokon tárolhatók. 

Kétféle kiszerelésben elérhető:

A6001 200 x 50 ul reakcióhoz (5 x 1ml)

A6002 1000 x 50 ul reakcióhoz (25 x 1 ml)

A kit tartalma: GoTaq® qPCR Master Mix 2X, 100X CXR Reference Dye, nukleáz-mentes víz

MINTAKÉRÉSI LEHETŐSÉG !!!

A termékből korlátozott számban tudunk mintát rendelkezésre bocsájtani. Ha szeretné kipróbálni a terméket, kérjük, töltse ki a következő adatlapot.

Kiváncsi, mit mondanak mások a termékről ? Kattintson ide

GoTaq qPCR Master Mix E-Brochure

__________________________________________________________________________________________________

•   A pGEM®-T és pGEM®-T Easy klónozó rendszerek jellemzői:

• PCR termék közvetlen klónozására szolgáló vektorok (TA-klónozás)
• A felnyitott vektor mindkét végén 3'-T túlnyúló vég található, mely a legtöbb polimeráz által a PCR termék 3' végére szintén túlnyúló bázisként rátett A-el kompatibilis
• Megbízható, bevált termékcsalád régóta a tudomány szolgálatában: több ezer hivatkozás
• Flexibilis vektor: számtalan, gyakori restrikciós hely az MCS-nál
• Az inszert könnyű kivágása egy enzimmel: páros restrikciós helyek az inszert kétoldalán - BstZI (pGEM-T); BstZI + EcoRI + NotI (pGEM-T Easy)
• A pGEM Vector System tartalma (20 ligáláshoz):
  • pGEM-T vagy pGEM-T Easy vektor
  • Kontroll inszert DNS
  • A legendás T4 DNS ligáz
  • 2X Rapid Ligation Buffer
• Választható kiszerelés: JM109 kompetens sejttel (Vector System II), vagy anélkül (I)
• Gyors ligálás mindössze1 óra alatt a 2X Rapid Ligation Buffer-rel
• Standard kék/fehér szelekció a rekombináns klónok gyors azonosításához
• Szekvenáláshoz előkészítve: SP6, T7 és M13 szekvenáló primer kötő helyek
• f1 replikációs origó: egyszálú DNS készítésének lehetősége

A 3'-5' exonukleáz aktivitással rendelkező (proofreading) polimerázok (Pfu, Tli) termékei tompa végűek, ezért közvetlenül nem klónozhatók a pGEM-vektorokba. Ehhez kiegészítő lépésben 3' A-overhang-et produkáló enzim és dATP hozzáadása szükséges.

PCR klónozás a Promegánál (pdf); GYIK a pGEM-el kapcsolatban.

4 lépés a sikeres klónozáshoz:

• Amplifikálás: GoTaq M3171, GoTaq Flexi M8301, GoTaq Green/Colorless Master Mix M7112/M7142, dNTP mix U1511
• Tisztítás: a PCR termék tisztítása gélből, vagy közvetlenül a PCR reakcióból (Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System A9281)
• Klónozás: a tisztított PCR termék beligálása a megfelelő pGEM-vektorba
• Transzformálás: az inszertet tartalmazó vektor bejuttatása kompetens sejtbe (JM109 kit alkotórész, vagy egyéb: DH5α®, DH10B^TM, DH12S^TM, SURE®, TG1, XL1 Blue®).

 A pGEM-T és a TOPO TA klónozó rendszerek klónozási hatékonyságának összehasonlítása.

• A LigaFast® Rapid DNA Ligation System ragadós- és tompa végű DNS-darabok gyors és hatékony ligálását teszi lehetővé plazmid vektorokba. 

• A legendás Promega T4 DNS ligáz és 2X Rapid Ligation Buffer egyedülálló kombinációja
• Egyszerűség: Ligálást követően nincs szükség DNS-tisztításra a transzformációt megelőzően 
• Gyorsaság: Ligálás 5 perc alatt kohezív végek esetén, 15 percen belül tompa végeknél szobahőmérsékleten
• A különleges 2X Rapid Ligation Buffer-hez se ATP-t, se Mg2+-ot nem kell hozzáadni
• Kétféle liszerelés: 30 ligáláshoz (M8221) 150 ligáláshoz (M8225) 

• RNasin® és rekombináns RNasin® ribonukleáz inhibítorok

• Megbízható, bevált termékek régóta a tudomány szolgálatában: RNasin® - 1982, rRNasin® - 1996
• Natív (humán placenta - RNasin®), vagy rekombináns eredet (E.coli - rRNasin®)
• Széles spektrumú RNáz gátlás: eukarióta RNázok, pl RNáz A, B, C és humán placentális RNáz. (A gátlás nem működik RNáz T1, S1 nukleáz,  Aspergillus RNáz, RNase H, RNase ONE^TM Ribonuclease (Promega termék) esetében)
• Garantáltan kompatibilisek a következő Promega termékekkel:
  • SP6, T7 or T3 RNS Polymerase;
  • ImProm-II®, AMV or M-MLV Reverz  Transzkriptáz
  • Taq DNS Polymerase
• Széles pH-tartományban aktívak:  pH 5-8
• RNáz gátlás nem-kovalens kötődés révén (Ki = 10^-14M)

      Alkalmazási területek:

• RT, RT-PCR
• In vitro transzkripció/transzláció
• In vitro vírus replikáció növelése
• RNS transzláció hatékonyabbá tétele homológ rendszerekben
• RNáz-mentes antitest-tisztítás
• RNS kihozatal növelése a Riboprobe® rendszerben 

A Promega RNasin® & rRNasin® inhibítorok már bizonyítottak, a világon számos molekuláris-biológiai laborban régóta az RNS-el való munka elmaradhatatlan kiegészítői.Hivatkozások a termékekkel kapcsolatban:RNasin® ,  rRNasin®

• RNasin® plus ribonukleáz inhibítor

• Újfajta, extrém hőtűrő emlős rekombináns (E.coli) RNáz inhibítor
• Egyedülálló termék a piacon
• Megnövelt védelem az oxidációval szemben az RNasin-hoz és rRNasin-hoz képest (hiányzó SH-csoport az inhibítor aktív helyén)
• Hatékony tisztítás: 90 %-nál nagyobb tisztaság E.coli RNáz szennyezés nélkül
• Garantált kompatibilitás az RT/-PCR rendszerekkel:
  • Access és AccessQuick^TM RT-PCR Systems (AMV/Tfl)
  • ImProm-II^TM Reverse Transcription System
  • Reverse Transcription System (AMV)
  • TaqMan^® - alapú real-time (RT)-PCR
• Védelem az RNS-templát denaturáció alatt: nincs reaktiváció az RNasin/RNáz elegy még 15 perces 70 fokon történő melegítése után sem !
• Védelem magasabb hőmérsékletű RT-reakcióknál:biztonságos RT-reakciók 50 fok felett is AMV vagy ImProm-II enzimmel

Alkalmazások: RT, RT-PCR, Q-RT-PCR, in vitro transzkripció/transzláció. Hivatkozások: RNasin® plus

• ImProm-II^TM Reverse Transcription System és enzim

Robusztus rendszer first-strand cDNS szintézishez, ajánlott elsősorban ritka vagy hosszú transzkriptumok átírásához. Improm-II hivatkozások

• Nagy hatékonyság: akár 9 kb hosszúságú RNS templát teljes visszaírásához
• Széles hőmérséklettartomány: 37 - 55ºC
• Teljes rendszer: az enzimen kívül mindent tartalmaz: oligo (dT)₁₅ és random primert,  a  dNTP mixet,  rekombináns RNasin^TM ribonukleáz inhibítort, továbbá pozitív kontrollt.
• Skálázható és flexibilis: a 20 ul-es RT reakcióból a teljes térfogat továbbvihető a PCR-ben
• Kompatibilitás: tetszés szerinti DNS polimeráz választható (pl. GoTaq vagy GoTaq Flexi
• Microarray kompatibilis: Cy3, Cy5, vagy amino-allyl nukleotidok beépítéséhez

 

• Az új Single Step (KRX) kompetens sejt egyaránt használható klónozáshoz és fehérjeexpresszióhoz. A transzformációs hatékonyság nagyobb mint 10⁸cfu/ug. A KRX törzs (módosított E. coli K törzs) kromoszómálisan hordozza a T7 RNS polimeráz génjét. A gén ramnóz promóter kontrollja alatt áll, lehetővé téve T7 promóterről történő expresszió szenzitív kontrollját. Az expressziós szint hasonló, vagy magasabb, mint a BL21-törzsek esetén. További információk   

• A Plexor qPCR és qRT-PCR System multiplexelésre alkalmas újfajta real-time platform. A PCR reakció során fluoreszcens jelintenzitás csökkenés következik be módosított bázisok segítségével. Nincs szükség külön próbára, a két primer közül csak az upstream van fluoreszcens donorral jelölve a 0. pozíción, ami egy iso-dC bázis. A master mixben - mely egy újfajta primer-dimer inhibítort is tartalmaz - lévő iso-dGTP hordozza a quenchert. A csak iso-dC-vel párosodó és az ellenkező láncba beépülő iso-dGTP, rajta a quencherrel kioltja a fluoreszcens jelet. A PCR után a SYBR Green metódushoz hasonlóan melting curve analízist végezhetünk. A rendszer nagy előnye, hogy más termékekhez képest megbízhatóan és egyszerűen hajthatunk végre - a real-time készülék optikájától függően - akár 4-plex vizsgálatot fáradságos primertervezés nélkül. A rendszer kompatibilis csaknem az összes jelenleg elérhető készüléktípussal. A  
A Plexor platform három részből áll:

Plexor kitek: 3-féle kapható, melyek a primeren kívül minden alkotórészt tartalmaznak. Az oligó szintéziséhez a Promega az általunk forgalmazott IDT céget ajánlja.
Plexor Primer Design Software: az ingyenes multiplex primer tervező program a készülékünk optikájának megfelelően választja ki a fluoreszcens festéke(k)et és e-mailben értesít a szükséges oligók szekvenciáiról. A programmal közvetlen BLAST ellenőrzést végezhetünk. Választhatunk, hogy génexpressziós vagy SNP módban szeretnénk használni a Plexort. 
Plexor Analysis Software: a szintén ingyenes analízis szoftver a real-time készülékből exportált nyers adatfájlok analízisét végzi.

Ismerje meg Ön is Plexor-t ! 1. Animáció 2. Bemutató (PowerPoint)

A Plexort elsősorban azok számára javasoljuk, akik szeretnék kihasználni a multiplex real-time PCR nyújtotta lehetőségeket , továbbá kevés génnel dolgoznak sok azonos reakciót futtatva.

További információk

Ha szeretné kipróbálni a Plexort, kérjük forduljon hozzánk bizalommal.

• A Promega új GoTaq® polimeráz családja egy természetesen előforduló, Thermus aquaticus-ból izolált poszt-transzlációsan módosított enzimre épül, ami nem rendelkezik 5' exonukleáz aktivitással. Az új enzimmel széles templáttományban, nagy kitermeléssel és szenzitivitással dolgozhatunk.
Több kiszerelésben kapható, egyikük a GoTaq formula. A 7.5 mM MgCl₂-os 5X reakciópufferben lévő zöld festék az elektroforézis nyomonkövetését segíti, mely futtatás során egy sárga (~50 bp) és egy kék (3-5 kb) komponensre válik szét. A zöld pufferen kívül a polimerázhoz tartozik egy színtelen puffer is; ezt azoknak javasoljuk, akik a PCR-ben keletkező DNS fluoreszcenciás vizsgálatát, vagy UV abszorbanciás koncentrációmérését kívánják elvégezni. Ha a PCR reakció magnézium igénye eltér az itt biztosított 1,5 mM végkoncentrációtól, akkor a GoTaq Flexi-t ajánljuk, ami külön oldatként tartalmazza a MgCl₂-ot (25 mM). A PCR reakció - mindkét pufferrel - közvetlenül az agaróz gél zsebeibe mérhető .
A termékcsalád tagja még a GoTaq Green Master Mix (2X), amihez csak a templátot és a primereket kell hozzáadni. A mix színtelen változata is elérhető GoTaq Colorless Master Mix néven. Az új polimerázzal kapott PCR termék közvetlenül alkalmas A-T klónozáshoz, mivel a 3' végekre itt is adenin kerül, továbbá kompatibilis más Promega termékekkel. Mivel az enzim nem rendelkezik 5' exonukleáz doménnal, ezért nem használható ilyen aktivitást igénylő real-time reakciókban.

• A GoTaq® Hot Start Polimeráz egy elsődleges ellenanyaghoz kapcsolt GoTaq® DNS polimeráz, mely időlegesen gátolja a polimeráz enzim aktivitását. Az enzim az első denaturációs lépést követően nyeri vissza aktivitását, mely a reakció specifitását jelentősen megnöveli. A GoTaq Hot Start Polimeráz 5'-3' exonuclease aktivitással rendelkezik. A Promega megbízhatóságára és a GoTaq következetesen magas minőségére alapozva ajánljuk Önöknek a régóta várt Hot Start polimeráz enzimet.

• Megnövelt hozam, érzékenység és specifitás: A bizonyítottan magas hozamú, és nagy érzékenységű GoTaq enzim a beépített hot starttal magasabb specifitást biztosít bármely alkalmazáshoz.
• Gyors aktiválási idő: A mindössze két perces aktiválási idő megnöveli az enzim élettartamát, valamint lecsökkenti az eredmény megtekintéséig eltelt várakozási időt.
• Egyszerű és kényelmes kezelés: A szobahőmérsékletre optimalizált és „direct-to-gel" reakciópuffer és gélfesték növeli a hatékonyságot.
• Optimalizálás: Speciális templátokhoz a magnézium-ion koncentráció rugalmasan beállítható.
• Megnövelt hatékonyság: A PCR után közvetlenül felvihetjük a mintát a gél-analízishez. A Green GoTaq puffer egyszerre szolgál PCR-reakció pufferként, valamint gélfestékként is! A GoTaq Hot Start rendszer tartalmaz 25 mM MgCl2-ot, lehetővé téve a magnézium-ion koncentráció optimalizálását a reakciókban. Emellett tartalmaz még 5X Green és Colorless GoTaq Flexi puffereket is, mely a minta sűrűségét megnövelve lehetővé teszi a reakció utáni közvetlen mintafelvitelt a gélre.
• Ajánlott alkalmazások: A GoTaq Hot Start enzimet ajánljuk minden eddig ismert PCR-alkalmazáshoz, ahol szükség van nagyfokú specifitásra (pl. genetikai azonosítás, fingerprintek, transzformánsok ellenőrzése, stb.), a RealTime-PCR felhasználók számára pedig nélkülözhetetlen segédeszköznek számít
• Mastermix formában is elérhető: GoTag HotStart Green és Colorless Master Mix, az utóbbi például passzív referencia festéket nem igénylő real-time PCR készülékekhez próbás rendszerben remek választás.

Utolsó frissítés: 2010.04.15

© Bio-Science Kft. / 1119 Budapest, Andor u. 47-49. / T: 463-5077 / / Honlapkészítés: webdoktor.hu